Меркурид

В структуре научных исследований при раке молочной железы (РМЖ) большое место занимает иммунологическая тематика. В последнее десятилетие авторитетные американские журналы представили серию статей, доказывающих главную роль иммунной системы человека в прогнозе РМЖ. Большинство выводов сделано при изучении взаимодействия между Т-хелперными (CD4), Т-цитотоксическими (CD8) лимфоцитами и макрофагами, присутствующими в ткани опухоли, то есть интратуморальнимы клетками иммунной системы. Показано важную прогностическую роль количественного и качественного состава интратуморальних лимфоцитов, особенно CD8+ и Т-цитотоксических клеток, в прогнозе РМЖ.

Результаты этих работ проливают свет на то, какие клетки иммунной системы являются наиболее важными с точки зрения противоопухолевого иммунитета, и нацеливают на поиск иммунологических путей воздействия для активации данных клеточных типов. Исследования в этом направлении особенно широко стали проводиться с внедрением в клиническую практику моноклональных антител как к лейкоцитарным молекулам, так и к антигенам и рецепторам, специфичных для эпителиальных клеток.

Длительное проведения лучевой и химиотерапии нередко ведет к существенному угнетению показателей иммунитета и нарушения иммунологического гомеостаза. С учетом этого, особый интерес представляет динамика изменений лимфоцитов CD3, CD4, CD8, индекса CD4/CD8 и др. На этом фоне, как показано в наших предыдущих исследованиях, особенно актуально использование лекарственных препаратов, обладающих иммунотропным эффектом.

Цель исследования.

Выяснить иммунологические эффекты препаратов на основе хелатных ртутьсодержащих комплексов (РСК), применяемых одновременно с неоадъювантной химиотерапией при раке молочной железы.

Объект и методы исследования.

Для решения поставленной задачи было изучено две группы больных раком молочной железы: 1 группа (30 человек) — неоадъювантная химиотерапия по схеме AC (адриабластин + циклофосфан) на фоне РСК (исследуемая группа); 2 группа (30 человек) — неоадъювантная химиотерапия по схеме AC (адриабластин + циклофосфан) без РСК (группа контроля). Пациенты получали препараты на основе РСК в промежутках между 1-3 курсами по стандартной схеме (перорально, однократно — 7 г/сутки; в данном исследовании использовался препарат фирмы «Меркурид», в основе которого хелатные соединения ртути с аминокислотой цистеин).

В ходе исследования у пациентов учитывались выходные параметры РМЖ с помощью физикального, маммографического, цитологического и гистоморфологичного методов. Также исследовалось состояние жизненно важных систем организма перед началом лечения (ЭКГ, общий анализ крови, протеинограма). Оценка результатов неоадъювантной химиотерапии у больных раком молочной железы (контрольная группа) проводилась с помощью физикального, маммографического и гистологического (степень патоморфоза) методов исследования. Иммунологическая динамика оценивалась по характеру субпопуляционных изменений лейкоцитов, которые проявляются специфическими моноклональными антителами к соответствующим CD факторам по стандартной методике.

Результаты исследования и их обсуждение.

Как показало исследование, у больных РМЖ снижается содержание лейкоцитов, лимфоцитов за счет клеток с фенотипом CD3+ и CD8+ как следствие не только опухолевой интоксикации, но и последствий химиотерапии.

В результате снижения уровня CD8+ — лимфоцитов, индекс CD4/CD8 повышается. У больных РМЖ с исходно сниженным числом CD3+ и CD4+ клеток, происходит восстановление этих показателей. При этом прием РСК не оказывал стимулирующего влияния на показатели больных с исходно нормальным количеством Т-лимфоцитов и Т-хелперов. Прием РСК способствовал увеличению числа лимфоцитов с 1,3±0,4% до 2,4±0,9%. В группе контроля, изменения не имели столь выраженного характера — 1,4±0,3% до 1,5±0,7% соответственно. Наиболее значимые изменения были связаны с увеличением числа CD3+ и CD8+, а также с нормализацией иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 (Таблица 1).

Таблица 1.

Динамика изменений лимфоцитов CD3, CD4, CD8 и индекса CD4/CD8 в ходе лечения при РМЖ

Представляет также интерес динамика изменения количества лимфоцитов с фенотипом CD16 (NK-клетки). Нормальные киллеры — NK (от англ. Natural killer) — составляют около 5% от лимфоцитов в периферической крови. Эти клетки не проходят дифференцировку в тимусе, выходят из костного мозга в кровь и затем мигрируют в ткани, где осуществляют врожденную иммунную защиту, что называется естественной цитотоксичностью, которая особенно важна при опухолевом процессе. В цитоплазме NK-клеток содержатся многочисленные гранулы, содержащие перфорин и гранзимы. Кроме того, NK-клетки продуцируют TNF-α, который может индуцировать апоптоз клеток-мишеней. NK-клеточный дефицит усиливается по мере опухолевой прогрессии и поэтому зависит от клинической стадии заболевания. Так, в нашем случае 68% пациенток до начала терапии имели измененное количество NК-клеток (CD16). При приеме РСК отмечалось повышение этого показателя по сравнению с контрольной группой. Так, при приеме РСК улучшения показателей до нормального уровня отмечено у 76% пациентов, в контрольной группе в 34%. Общая динамика представлена ​​в Таблице 2.

Таблица 2.

Динамика изменения количества лимфоцитов с фенотипом CD16 в ходе неоадъювантной терапии РМЖ

Особый интерес представляет динамика изменения количества лимфоцитов с фенотипом CD25, CD95, непосредственно связано с апоптозом. В рамках иммунной системы апоптоз рассматривается не только как механизм негативной селекции аутореактивных клонов в онтогенезе, но и как ключевой механизм регуляции Т-клеточного гомеостаза. Развитие иммунологического дисбаланса, нарушения активации лимфоцитов, цитокинового статуса, которое наблюдается при химиотерапии у онкологических больных, сопровождается изменением экспрессии CD95 и связано с аномальным апоптозом иммуноцитов. В связи с этим оценка числа CD95-экспрессирующих лимфоцитов может стать ценным дополнением к характеристике субпопуляционной структуры в комплексной оценке иммунного статуса и определения прогноза.

В исследовании большинство пациентов (87%) имели повышенную экспрессию Fas-рецептора CD95+ и пониженную к интерлейкину-2 (CD25), что характерно не только для Th2 варианта ответа иммунной системы, но и для гиперпродукции провоспалительных цитокинов. CD95 (Fas или APO1) — трансмембранный гликопротеин, который относится к семейству фактора некроза опухолей.

Связывание этой молекулы с Fas-лигандом приводит к индукции программируемой клеточной гибели CD4+, CD8+, CD16+ клеток. Так, можно предположить, что высокий уровень CD95+ и фактора некроза опухоли приводит к апоптической гибели активированных лимфоцитов. В группе, принимавшей РСК, замечено повышение экспрессии лимфоцитов с фенотипом CD25+ и снижение CD95+, что коррелирует с увеличением продукции интерлейкина-2 — цитокина, который повышает цитолитическую функцию Т-киллеров и NK-клеток, увеличивает продукцию этими клетками перфоринов и интерферона-γ. Снижение экспрессии CD95+ защищает лимфоциты от апоптической гибели. В иммунологической динамике это выражается повышением количества CD4+, CD8+, CD16+ клеток по сравнению с группой контроля (Таблица 3).

Таблица 3.

Динамика изменения лимфоцитов CD25, CD95 в ходе неоадъювантной терапии РМЖ

Известно, что в опухолевых очагах присутствуют клетки, в которых происходит устойчивая экспрессия CD38. CD38 повышается при карциноме молочной железы, начиная со второй стадии опухолевого роста и сохраняется повышенным на следующих стадиях независимо от места расположения очагов метастазирования. Наиболее высокое содержание исследуемого антигена наблюдается при комбинированной гистологической структуре опухоли, статистически достоверно повышенные уровни CD38 сохраняются как при наличии одиночных, так и множественных очагов поражения.

Модель участия CD38 антигена в ограничении процессов миграции мононуклеарных клеток из сосудистого русла в тканевое пространство и соответственно к месту локализации опухоли, отражает один из путей, с помощью которых формируются механизмы выскальзывания опухолевых клеток из-под надзора со стороны иммунной системы. Таким образом, CD38 целесообразно использовать в качестве прогностического показателя в процессе лечения РМЖ (Таблица 4).

Таблица 4.

Динамика изменения лимфоцитов CD38 в ходе лечения РМЖ

Изучение взаимосвязи иммунной реакции со степенью распространенности РМЖ позволило выявить важную роль CD45 — антигена лейкоцитов, принадлежащих к семейству тирозинфосфатазных рецепторов. Так, с уменьшением общего уровня лейкоцитарной инфильтрации (CD45+) вероятно увеличивается частота метастатического поражения регионарных лимфоузлов.

По нашему мнению, общий уровень местной иммунной реакции, оцененный по CD45, может быть самостоятельным фактором благоприятного прогноза у больных РМЖ. Как показало наше исследование, этот уровень вырос с 11,9±2,1% до 21,4±3,6% в группе, получавшей РСК, тогда как в группе контроля рост составил 15,6±2,9% по сравнению с 12,3±2,8% до лечения.

Выводы.

Препараты на основе РСК хорошо переносятся, не вызывая привыкания и развития побочных реакций. Использование их в комплексной терапии обеспечивает каскад адаптивных иммунологических противоопухолевых реакций организма, что ведет к повышению эффективности и переносимости химиотерапии, уменьшению побочных эффектов. Среди иммунологических эффектов РСК надо отметить:

• предотвращение апоптической гибели иммунных клеток, индуцированной как опухолью, так и химиотерапией;
• увеличение числа лимфоцитов с фенотипом CD3, CD4, CD8;
• нормализация иммунорегуляторного индекса CD4/CD8;
• рост киллерной активности NK-клеток.

Кроме того, снижение экспрессии CD38 предотвращает эффект иммунного выскальзывания опухоли, а активизация CD45 увеличивает шансы на выживание пациента.

Перспективы дальнейших исследований.

Современные препараты имеют ограничения, обусловленные токсичностью, которая сдерживает их использование в противоопухолевой терапии. Поэтому поиск новых молекул для терапии рака продолжает оставаться актуальной проблемой. Препараты на основе РСК расширяют спектр потенциальных таргетных противоопухолевых лекарственных средств. Отсутствие в них побочного токсического эффекта открывает перспективу их использования самостоятельно или в комплексе с известными химиопрепаратами при раковых заболеваниях различной локализации. Все это требует дальнейшего исследования лечебного действия РСК в комплексе с изучением иммуноморфологических механизмов, через которые возможно реализовать таргетные эффекты.